Universidad de AlcaláUnidad docente de Bioquímica y Biología Molecular

Prácticas de laboratorio

Uso del espectrofotómetro

1. Cubetas de espectrofotómetro

Tipos de cubeta y cómo manejarlas.

Vídeo 2min 15s (6.6 MB) cargar
(vista superior)

2. Llenado y vaciado de las cubetas con muestra

Vídeo 3min 35s (17 MB) cargar

Recomendaciones:

  • Asegurarse de la ausencia de manchas en la cubeta, líquido en su exterior, burbujas en el interior, suciedad o turbidez en la muestra. Si la muestra está fría, las paredes externas de la cubeta podrían empañarse. Todo ello conduce a una medida de absorbancia alterada.
  • Introducir la cubeta al espectrofotómetro siempre en la misma orientación.
  • Nunca tocar las caras pulidas, especialmente su mitad inferior.
  • A la hora de medir varias muestras, comenzar por las de menos color e ir pasando a las de color progresivamente más intenso. Esto reduce la alteración de la medida debida a la pequeña cantidad de líquido residual que pueda quedar tras vaciar la cubeta.
  • Al retirar una muestra de la cubeta, nunca tirar su contenido; devolverlo al tubo de ensayo original. Sólo deben desecharse las muestras una vez se haya comprobado que las medidas de absorbancia no muestran anomalías. (Siempre se podrá repetir la medida si no se han tirado las muestras)

3. El espectrofotómetro: conexión y controles

(pulsa en los títulos a la derecha para que se señale sobre la imagen)

Compartimento de muestras

Se abre la tapa, se saca el soporte portador de cubetas, se coloca en él la cubeta, se introduce de nuevo soporte con cubeta y se cierra la tapa para poder calibrar el blanco o tomar la medida.

Pantalla con la medida

Atención al punto decimal, sin un cero delante: ".232" significa A = 0.232

Control de modalidad

  • Absorbancia
  • Transmitancia

(Siempre usaremos absorbancia)

Indicador de modalidad

  • Absorbancia
  • Transmitancia

Control de longitud de onda

Gira la rueda para elegir la deseada (en nanómetros), acorde a la sustancia que se quiere medir.

Calibración del blanco

Pulsa para conseguir:

  • cero de absorbancia
  • 100% de transmitancia

Con la muestra del blanco dentro, se pulsa y se espera a que en lugar de BLA la pantalla muestre .000 (esto se demuestra en el vídeo nº 4)

 

Vídeo 1min 19s (4.7 MB) cargar

4. Calibración y toma de medidas de absorbancia

Vídeo 2min 4s (9 MB) cargar

 

Autor: Angel Herráez. Licencia Creative Commons Reconocimiento–NoComercial–CompartirIgual